Frazioni derivate dai tessuti comunemente utilizzate negli epatociti, S9 e nei test in vitro
Ecco un promemoria sulle caratteristiche e le differenze dei componenti derivati dal tessuto epatico che sono ampiamente utilizzati negli studi in vitro di farmacocinetica e nella ricerca sul metabolismo dei farmaci.
epatociti
Epatociti isolati da una sospensione (omogenato di fegato, cellule senza fegato) ottenuta per frantumazione e omogeneizzazione del fegato.
Poiché gli epatociti vengono conservati così come sono, sono relativamente vicini a quelli in vivo. Buona anche la riproducibilità della reazione di coniugazione, di cui è difficile procedere con le frazioni S9 e microsoma.Può essere utilizzato per l'assorbimento tramite trasportatori, interazioni farmaco-farmaco e valutazione dell'induzione dell'enzima CYP.D'altra parte, è necessario prestare attenzione al tasso di sopravvivenza durante la crioconservazione e lo scongelamento.
Frazione S9
Come immagine, una frazione contenente enzimi metabolici viene estratta dagli epatociti.
Il supernatante (supernatante) ottenuto mediante centrifugazione dell'omogenato di fegato rimuove le membrane cellulari, i nuclei e i mitocondri.Contiene molti enzimi coinvolti nel metabolismo dei farmaci come i seguenti.
Citocromo P450 (CYP), monoossigenasi contenente flavina (FMO), carbossesterasi (CES), epossido idrolasi (EH), UDP glucuronosiltransferasi (UGT), solfato transferasi (SULT), glutatione-S-transferasi (GST), metiltransferasi, acetiltransferasi eccetera.
Microsomi epatici
Precipitazione quando S9 viene ulteriormente centrifugato.Include frammenti del reticolo endoplasmatico (strappati durante la centrifugazione) e lisosomi.
Uno degli organelli.Ha una struttura con una pellicola reticolata.
Ha importanti funzioni nel metabolismo degli zuccheri / lipidi e nella sintesi di steroidi / proteine.
Il citocromo P450 e l'ossigenasi sono localizzati in un film.
Una vescicola costituita da un singolo strato di membrana.
Contiene idrolasi come glicosidasi e peptidasi.
Importante per le sostanze estranee nelle cellule e per l'autolisi.
Poiché molti farmaci e sostanze estranee vengono metabolizzati e disintossicati dal CYP, la "frazione microsomiale, che è un sistema semplice che include il CYP" è ampiamente utilizzata negli esperimenti (sebbene negli ultimi anni sia importante anche il metabolismo diverso dal CYP).È facile da usare per motivi quali stabilità contro la crioconservazione, riproducibilità e abbondanti prodotti commerciali.
CYP, UGT, CES, ecc.
Cytosol
Supernatant quando S9 viene ulteriormente centrifugato
GST, SULT, ecc.