Frações derivadas de tecido comumente usadas em hepatócitos, S9 e testes in vitro
Aqui está um memorando sobre as características e diferenças dos componentes derivados do tecido hepático que são amplamente usados em estudos in vitro de farmacocinética e pesquisa de metabolismo de drogas.
hepatocito
Hepatócitos isolados de uma suspensão (homogenato de fígado, células livres de fígado) obtida por esmagamento e homogeneização do fígado.
Uma vez que os hepatócitos são retidos como estão, eles estão relativamente próximos de in vivo. A reprodutibilidade da reação de conjugação, que é difícil de prosseguir com as frações S9 e microssomas, também é boa.Pode ser usado para absorção por meio de transportadores, interações medicamentosas e avaliação da indução da enzima CYP.Por outro lado, é necessário atentar para a taxa de sobrevivência durante a criopreservação e descongelamento.
Fração S9
Como imagem, uma fração contendo enzimas metabólicas é extraída dos hepatócitos.
O sobrenadante (sobrenadante) obtido pela centrifugação do homogenato de fígado remove as membranas celulares, núcleos e mitocôndrias.Ele contém muitas enzimas envolvidas no metabolismo da droga, como as seguintes.
Citocromo P450 (CYP), monooxigenase contendo flavina (FMO), carboxiesterase (CES), epóxido hidrolase (EH), UDP glucuronosiltransferase (UGT), sulfato transferase (SULT), glutationa-S-transferase (GST), metiltransferase, acetiltransferase, etc.
Microssomas de fígado
Precipitação quando S9 é posteriormente centrifugado.Inclui fragmentos de retículo endoplasmático (rasgados durante a centrifugação) e lisossomas.
Uma das organelas.Possui estrutura com filme reticulado.
Tem funções importantes no metabolismo de açúcar / lipídios e na síntese de esteróides / proteínas.
O citocromo P450 e a oxigenase são localizados em um filme.
Uma vesícula que consiste em uma única camada de membrana.
Contém hidrolases como glicosidases e peptidases.
Importante para substâncias estranhas em células e autólise.
Uma vez que muitas drogas e substâncias estranhas são metabolizadas e desintoxicadas pelo CYP, a "fração de microssoma, que é um sistema simples incluindo o CYP" é amplamente usada em experimentos (embora o metabolismo diferente do CYP também seja importante nos últimos anos).É fácil de usar por razões como estabilidade contra criopreservação, reprodutibilidade e produtos comerciais abundantes.
CYP, UGT, CES, etc.
Citosol
Sobrenadante quando S9 é posteriormente centrifugado
GST, SULT, etc.