Fracciones derivadas de tejido que se utilizan comúnmente en hepatocitos, S9 y pruebas in vitro
A continuación, se incluye un memorando sobre las características y diferencias de los componentes derivados del tejido hepático que se utilizan ampliamente en estudios in vitro de farmacocinética e investigación del metabolismo de fármacos.
hepatocito
Hepatocitos aislados de una suspensión (homogeneizado de hígado, células libres de hígado) obtenida triturando y homogeneizando el hígado.
Dado que los hepatocitos se retienen tal como están, están relativamente cerca de in vivo. La reproducibilidad de la reacción de conjugación, que es difícil de llevar a cabo con las fracciones de microsomas y S9, también es buena.Puede utilizarse para la captación a través de transportadores, interacciones farmacológicas y evaluación de la inducción de la enzima CYP.Por otro lado, es necesario prestar atención a la tasa de supervivencia durante la criopreservación y descongelación.
Fracción S9
Como imagen, se extrae de los hepatocitos una fracción que contiene enzimas metabólicas.
El sobrenadante (sobrenadante) obtenido al centrifugar el homogeneizado de hígado elimina las membranas celulares, los núcleos y las mitocondrias.Contiene muchas enzimas involucradas en el metabolismo de los fármacos, como las siguientes.
Citocromo P450 (CYP), monooxigenasa que contiene flavina (FMO), carboxiesterasa (CES), epóxido hidrolasa (EH), UDP glucuronosiltransferasa (UGT), sulfato transferasa (SULT), glutatión-S-transferasa (GST), metiltransferasa, acetiltransferasa etc.
Microsomas hepáticos
Precipitación cuando S9 se centrifuga más.Incluye fragmentos de retículo endoplásmico (desgarrados durante la centrifugación) y lisosomas.
Uno de los orgánulos.Tiene una estructura con una película reticulada.
Tiene funciones importantes en el metabolismo del azúcar / lípidos y en la síntesis de esteroides / proteínas.
El citocromo P450 y la oxigenasa se localizan en una película.
Vesícula que consta de una sola capa de membrana.
Contiene hidrolasas como glicosidasas y peptidasas.
Importante para sustancias extrañas en células y autólisis.
Dado que muchas drogas y sustancias extrañas son metabolizadas y desintoxicadas por CYP, la "fracción de microsomas, que es un sistema simple que incluye CYP", se usa ampliamente en experimentos (aunque el metabolismo distinto del CYP también es importante en los últimos años).Es fácil de usar por razones como estabilidad frente a la crioconservación, reproducibilidad y abundancia de productos comerciales.
CYP, UGT, CES, etc.
Citosol
Sobrenadante cuando S9 se centrifuga más
GST, SULT, etc.