[पेपर मेमो] एचपीएलसी-यूवी-एमएस पर एक यूवी डिटेक्टर से पराबैंगनी प्रकाश द्वारा नमूनों का ऑक्सीकरण
पेपर मेमो
एचपीएलसी-यूवी-एमएस विश्लेषण में, यूवी डिटेक्टर से निकलने वाली पराबैंगनी किरणें नमूने का ऑक्सीकरण करती हैं, जिसे एमएस स्पेक्ट्रम पर एक विरूपण साक्ष्य के रूप में पाया जाता है।
लक्ष्य साहित्य
एचपीएलसी-यूवी-एमएस विश्लेषण: गंभीर ऑक्सीकरण कलाकृतियों के लिए एक स्रोत
लेखक (संबद्धता): फ्रिट्ज श्वेकार्ट और गुस्ताफ हुल्थे (एस्ट्राजेनेका)
जर्नल (प्रकाशन तिथि): विश्लेषणात्मक रसायन विज्ञान (2019/01)
https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.analchem.8b05845
originalabstract
यूवी और एमएस दोनों के साथ एचपीएलसी कई क्षेत्रों में शुद्धता आकलन के लिए एक स्थापित सेटअप है। उभरती हुई तकनीक के साथ, उपकरण संवेदनशीलता बढ़ती है, कम नमूना एकाग्रता की मांग होती है, जबकि एक वाणिज्यिक यूवी डिटेक्टर सेल में प्रकाश प्रवाह पहले की तुलना में काफी अधिक है। अब पहुंच गया एमएस स्पेक्ट्रम में अवांछित आर्टिफैक्ट संकेतों को उत्पन्न करने के लिए विश्लेषण स्तरों की तुलना में यूवी प्रकाश द्वारा गठित रेडिकल पर्याप्त प्रचुर मात्रा में हैं। इस काम में हम फार्मास्युटिकल विकास से कई उदाहरण दिखाते हैं जहां यूवी डिटेक्टर में यूवी गिरावट गंभीर रूप से भ्रामक द्रव्यमान स्पेक्ट्रा की ओर ले जाती है। विशिष्ट दिन-प्रतिदिन के नमूनों में।
(पूर्ण अनुवाद)
एचपीएलसी-यूवी-एमएस सिस्टम, जो एक यूवी/विज़ (पराबैंगनी-दृश्य स्पेक्ट्रोस्कोपी) डिटेक्टर और मास स्पेक्ट्रोमीटर (एमएस) से जुड़ा एक उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) है, का व्यापक रूप से कई विश्लेषणात्मक क्षेत्रों में उपयोग किया जाता है।तकनीकी नवाचारों ने कम सांद्रता के नमूनों को मापना और उनका पता लगाना संभव बना दिया है, जबकि यूवी डिटेक्टर सेल से टकराने वाला चमकदार प्रवाह पहले की तुलना में अधिक है।परिणामस्वरूप, विश्लेषण के लक्ष्य की तुलना में यूवी द्वारा अपेक्षाकृत बड़ी मात्रा में कट्टरपंथी उत्पन्न हुए, और एमएस स्पेक्ट्रम पर कलाकृतियों को उत्पन्न करने के लिए पर्याप्त हो गए।इस अध्ययन में, हम दवा के विकास के उदाहरण का उपयोग यह दिखाने के लिए करते हैं कि यूवी-डिटेक्टेड ऑक्सीकरण नियमित, दिन-प्रतिदिन के विश्लेषणात्मक नमूनों में बड़े पैमाने पर स्पेक्ट्रा को गुमराह करता है।
概要
【तरीका】
लेखक यूवी डिटेक्टरों के साथ माप के दौरान एनालिटिक्स के ऑक्सीकरण को प्रदर्शित करने के लिए XNUMX से अधिक नमूनों का उपयोग करते हैं।मापन लक्ष्यों में अमीनो एसिड, पेप्टाइड्स, प्रोटीन, न्यूक्लिक एसिड और कम आणविक-भार वाले यौगिक शामिल हैं।
【नतीजा】
तरल अंतरण मार्ग के उन क्षेत्रों में यूवी का प्रभाव अधिक था जहां नमूना सांद्रता कम थी।दरअसल, पीक टॉप (XNUMX) की तुलना में, ऑक्सीडेंट पीक पीक स्टार्ट पॉइंट (XNUMX) और एंड पॉइंट (XNUMX) पर अधिक मजबूती से दिखाई देता है।चोटी के अंत में +XNUMX से +XNUMX ऑक्सीडेंट भी पाए जाते हैं।
चित्र 1. बोम्बेसिन (Pyr-QRLG-NQWAVGHLM-NH2) का मास स्पेक्ट्रा (1) अर्ली, (2) मेन, और (3) लेट एल्यूटिंग फ्रैक्शन ऑफ द पीक (एगिलेंट/ब्रूकर सिस्टम)। यूवी लैम्प के साथ स्पेक्ट्रम स्विच ऑफ को "नो यूवी" के रूप में दिखाया गया है।
टेक्स्टविभिन्न नमूनों के लिए (बॉम्बेसिन, साइटोक्रोम सी, लगभग 10 अवशेषों के पेप्टाइड्स, टीआरपी, मेट, केटोप्रोफेन, आदि), ज्ञात ऑक्सीडेटिव गिरावट उत्पादों और 1-ऑक्सीडेंट से 3-ऑक्सीडेंट (+16 से +48) को मापा गया। हालांकि, में कुछ मामलों में, 1-50 ऑक्सीकृत चोटियों में से प्रत्येक को अपरिवर्तित चोटी के लगभग XNUMX% की सापेक्ष तीव्रता पर पाया गया।
इसके अलावा, लेखक बताते हैं कि ऐसी ऑक्सीडेंट चोटियों की उपस्थिति को दो तरह से रोका जा सकता है।
① यूवी प्रकाश बंद करें
② बीएचटी को मोबाइल चरण में जोड़ें
नमूने का ऑक्सीकरण दोनों चरण बी कार्बनिक सॉल्वैंट्स, मेथनॉल और एसिटोनिट्राइल में देखा गया था, लेकिन एसीटोनिट्राइल अधिक ऑक्सीडेंट का उत्पादन करता प्रतीत होता है।इसके अलावा, चूंकि प्रवाह दर सीधे विकिरण समय से संबंधित होती है, प्रवाह दर जितनी तेज़ होती है, उतना ही कम ऑक्सीकृत होता है।
प्रभाव
मुझे पता था कि यह संभव था कि यूवी/विज़ डिटेक्टर से पराबैंगनी प्रकाश नमूना को ऑक्सीकरण करने का कारण बनता, लेकिन मुझे नहीं लगता था कि यह वास्तव में इतनी दूर जाएगा।
अज्ञात पदार्थों को मापते समय क्या इस दस्तावेज़ की सामग्री एक समस्या बन जाती है?मेटाबोलॉमिक्स में अज्ञात मेटाबोलाइट्स की ट्रेस मात्रा को मापते समय, ऑक्सीडेंट को गलती से अलग-अलग पदार्थों के रूप में गिना जा सकता है, और सापेक्ष मात्रा का ठहराव त्रुटियों का कारण हो सकता है।
इसका कारण यूवी द्वारा उत्पन्न प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस: रिएक्टिव ऑक्सीजन प्रजाति) जैसे हाइड्रॉक्सिल रेडिकल्स के साथ प्रतिक्रिया है, और लगभग 254 एनएम के अवशोषण तरंग दैर्ध्य के साथ यौगिकों के उत्तेजना के कारण अपघटन या अप्रत्यक्ष फोटोलिसिस है।
आसानी से ऑक्सीकृत होने वाले नमूनों को मापते समय सावधानी बरतना बेहतर लगता है।विशेष रूप से, अमीनो एसिड जैसे मेथियोनीन (मेट), ट्रिप्टोफैन (टीआरपी), सिस्टीन (सीआईएस), और टाइरोसिन (टीयर), पेप्टाइड्स और प्रोटीन युक्त, और यौगिकों को फोटोसेंसिटाइज़र के रूप में वर्गीकृत किया जाता है, जो कि सुगंधित छल्ले और कार्बोनिल समूह हैं। जैसे यौगिकों के साथ
ठीक है, ईमानदार होने के लिए, मैं अक्सर एमएस विश्लेषण में यूवी स्पेक्ट्रम को ठीक से संदर्भित नहीं करता, इसलिए इसे बंद करना बेहतर हो सकता है।
एलसी-यूवी-एमएस का उपयोग करते हुए सामान्य मात्रात्मक विश्लेषण में, आंतरिक और बाहरी मानकों का उपयोग किया जाता है, और इन्हें उसी तरह ऑक्सीकरण किया जाना चाहिए, इसलिए मुझे नहीं लगता कि यह विश्लेषण को बहुत प्रभावित करेगा (बेहद अगर नमूना कम एकाग्रता पर ऑक्सीकरण किया जाता है) स्तर, मात्रा की निचली सीमा बढ़ सकती है...)