[บันทึกกระดาษ] ออกซิเดชันของตัวอย่างด้วยแสงอัลตราไวโอเลตจากเครื่องตรวจจับ UV บน HPLC-UV-MS
บันทึกกระดาษ
ในการวิเคราะห์ HPLC-UV-MS รังสีอัลตราไวโอเลตที่ปล่อยออกมาจากเครื่องตรวจจับ UV จะออกซิไดซ์ตัวอย่าง ซึ่งตรวจพบว่าเป็นสิ่งประดิษฐ์บนสเปกตรัม MS
วรรณกรรมเป้าหมาย
การวิเคราะห์ HPLC–UV–MS: แหล่งที่มาของสารออกซิเดชันที่รุนแรง
ผู้แต่ง (สังกัด): Fritz Schweikart และ Gustaf Hulthe (AstraZeneca)
Journal (วันที่ตีพิมพ์): Analytical Chemistry (2019/01)
https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.analchem.8b05845
ต้นฉบับนามธรรม
HPLC ควบคู่กับทั้ง UV และ MS คือการตั้งค่าที่กำหนดขึ้นสำหรับการประเมินความบริสุทธิ์ในหลายๆ ด้าน ด้วยเทคโนโลยีที่พัฒนาขึ้นเรื่อยๆ ความไวของเครื่องมือจะเพิ่มขึ้น ทำให้ความเข้มข้นของตัวอย่างลดลง ในขณะที่ฟลักซ์แสงในเซลล์ตรวจจับ UV เชิงพาณิชย์จะสูงกว่ารุ่นก่อนๆ มาก จุดที่อนุมูลที่เกิดจากแสง UV มีมากเพียงพอเมื่อเทียบกับระดับ analyte เพื่อสร้างสัญญาณสิ่งประดิษฐ์ที่ไม่ต้องการในสเปกตรัม MS ในงานนี้ เราแสดงตัวอย่างจากการพัฒนาเภสัชภัณฑ์ที่การสลายตัวของรังสี UV ในเครื่องตรวจจับรังสี UV ทำให้เกิดแมสสเปกตรัมที่ทำให้เข้าใจผิดอย่างรุนแรง ในตัวอย่างวันต่อวันทั่วไป
(แปลฉบับเต็ม)
ระบบ HPLC-UV-MS ซึ่งเป็นโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) ที่เชื่อมต่อกับเครื่องตรวจจับ UV/Vis (รังสีอัลตราไวโอเลตที่มองเห็นได้) และแมสสเปกโตรมิเตอร์ (MS) ถูกนำมาใช้อย่างแพร่หลายในสาขาการวิเคราะห์ต่างๆนวัตกรรมทางเทคโนโลยีทำให้สามารถวัดและตรวจจับตัวอย่างที่มีความเข้มข้นต่ำลงได้ ในขณะที่ฟลักซ์ส่องสว่างที่ตกกระทบเซลล์เครื่องตรวจจับรังสียูวีจะสูงขึ้นกว่าเดิมผลที่ตามมาคือ UV จะสร้างอนุมูลปริมาณค่อนข้างมากเมื่อเทียบกับเป้าหมายของการวิเคราะห์ และกลายเป็นปริมาณที่เพียงพอสำหรับการสร้างสิ่งประดิษฐ์บนสเปกตรัม MSในการศึกษานี้ เราใช้ตัวอย่างการพัฒนายาเพื่อแสดงให้เห็นว่าการออกซิเดชันที่ตรวจจับด้วยรังสียูวีส่งผลให้เกิดแมสสเปกตรัมที่ทำให้เข้าใจผิดในตัวอย่างเชิงวิเคราะห์ที่ทำเป็นประจำทุกวัน
概要
【วิธี】
ผู้เขียนใช้ตัวอย่างมากกว่า XNUMX ตัวอย่างเพื่อสาธิตการเกิดออกซิเดชันของสารที่วิเคราะห์ระหว่างการตรวจวัดด้วยเครื่องตรวจจับรังสียูวีเป้าหมายการวัดประกอบด้วยกรดอะมิโน เปปไทด์ โปรตีน กรดนิวคลีอิก และสารประกอบที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่ำ
【ผลลัพธ์】
ผลกระทบของรังสียูวีมีมากกว่าในพื้นที่ของเส้นทางการถ่ายโอนของเหลวซึ่งมีความเข้มข้นของตัวอย่างต่ำแท้จริงแล้ว เมื่อเทียบกับจุดพีคบนสุด (XNUMX) พีคออกซิแดนท์จะปรากฏชัดเจนกว่าที่จุดเริ่มต้นพีค (XNUMX) และจุดสิ้นสุด (XNUMX)ตรวจพบสารออกซิแดนท์ +XNUMX ถึง +XNUMX ที่ปลายยอด
รูปที่ 1 สเปกตรัมมวลของ Bombesin (Pyr-QRLG-NQWAVGHLM-NH2) ใน (1) ต้น, (2) หลัก และ (3) ส่วนที่ชะล้างปลายของพีค (ระบบ Agilent/Bruker) สเปกตรัมด้วยหลอด UV ปิดเครื่องจะแสดงเป็น “ไม่มี UV”
วัฒนธรรมสำหรับตัวอย่างต่างๆ (Bombesin, Cytochrome C, เปปไทด์ของสารตกค้างประมาณ 10 ชนิด, Trp, Met, ketoprofen เป็นต้น) วัดผลิตภัณฑ์จากการย่อยสลายออกซิเดชันที่รู้จักและสารออกซิแดนท์ 1 ถึง 3 สารออกซิแดนท์ (+16 ถึง +48) อย่างไรก็ตาม ใน ในบางกรณี แต่ละพีคที่ออกซิไดซ์ 1-50 ถูกตรวจพบที่ความเข้มสัมพัทธ์ประมาณ XNUMX% ของพีคที่ไม่เปลี่ยนแปลง
นอกจากนี้ ผู้เขียนยังแสดงให้เห็นว่าการปรากฏตัวของยอดออกซิแดนท์ดังกล่าวสามารถป้องกันได้สองวิธี
① ปิดแสงยูวี
② เพิ่ม BHT ไปยังเฟสมือถือ
สังเกตการเกิดออกซิเดชันของตัวอย่างในตัวทำละลายอินทรีย์เฟส B ทั้งเมทานอลและอะซีโตไนไตรล์ แต่ดูเหมือนว่าอะซีโตไนไตรล์จะผลิตสารออกซิแดนท์มากกว่านอกจากนี้ เนื่องจากอัตราการไหลเกี่ยวข้องโดยตรงกับเวลาในการฉายรังสี ยิ่งอัตราการไหลเร็วเท่าไร ออกซิไดซ์ก็ยิ่งน้อยลงเท่านั้น
ความประทับใจ
ฉันรู้ว่ามันเป็นไปได้ที่แสงอัลตราไวโอเลตจากเครื่องตรวจจับ UV/vis จะทำให้ตัวอย่างออกซิไดซ์ แต่ฉันไม่คิดว่ามันจะไปได้ไกลขนาดนี้
เนื้อหาของเอกสารนี้กลายเป็นปัญหาในการตรวจวัดสารที่ไม่รู้จักหรือไม่?เมื่อวัดปริมาณสารเมแทบอไลต์ที่ไม่รู้จักในเมแทบอโลมิกส์ สารออกซิแดนท์อาจถูกนับเป็นสารต่างๆ อย่างผิดพลาด และการวัดปริมาณสัมพัทธ์อาจทำให้เกิดข้อผิดพลาด
สาเหตุคือปฏิกิริยากับชนิดออกซิเจนที่ทำปฏิกิริยา (ROS: Reactive Oxygen Species) เช่น อนุมูลไฮดรอกซิลที่เกิดจากรังสียูวี และการสลายตัวหรือโฟโตไลซิสโดยอ้อมเนื่องจากการกระตุ้นของสารประกอบที่มีความยาวคลื่นการดูดกลืนประมาณ 254 นาโนเมตร
ควรระมัดระวังในการตรวจวัดตัวอย่างที่ออกซิไดซ์ได้ง่ายโดยเฉพาะอย่างยิ่ง กรดอะมิโน เช่น เมไทโอนีน (Met) ทริปโตเฟน (Trp) ซีสเทอีน (Cys) และไทโรซีน (Tyr) เปปไทด์และโปรตีนที่มีสิ่งเหล่านี้ และสารประกอบที่จัดเป็นสารไวแสง นั่นคือ วงแหวนอะโรมาติกและหมู่คาร์บอนิล เช่น สารประกอบด้วย
พูดตามตรง ฉันมักไม่อ้างอิงถึงสเปกตรัม UV อย่างถูกต้องในการวิเคราะห์ MS ดังนั้นควรปิดไว้จะดีกว่า
ในการวิเคราะห์เชิงปริมาณโดยทั่วไปโดยใช้ LC-UV-MS จะใช้มาตรฐานภายในและภายนอก และสิ่งเหล่านี้ควรถูกออกซิไดซ์ด้วยวิธีเดียวกัน ดังนั้นฉันไม่คิดว่ามันจะส่งผลกระทบต่อการวิเคราะห์มากนัก (อย่างมาก หากตัวอย่างถูกออกซิไดซ์ที่ความเข้มข้นต่ำ ระดับ ขีดจำกัดล่างของปริมาณอาจเพิ่มขึ้น...)