[Paper memo] Oxy hóa mẫu bằng tia cực tím từ đầu dò UV trên HPLC-UV-MS
giấy ghi nhớ
Trong phân tích HPLC-UV-MS, các tia cực tím phát ra từ máy dò UV làm oxy hóa mẫu, được phát hiện dưới dạng vật phẩm giả trên phổ MS.
Mục tiêu văn học
Phân tích HPLC–UV–MS: Nguồn tạo tác ôxi hóa nghiêm trọng
Tác giả (Liên kết): Fritz Schweikart và Gustaf Hulthe (AstraZeneca)
Tạp chí (Ngày xuất bản): Hóa phân tích (2019/01)
https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.analchem.8b05845
bản tóm tắt ban đầu
HPLC kết hợp với cả UV và MS là một thiết lập đã được thiết lập để đánh giá độ tinh khiết trong nhiều lĩnh vực. Với công nghệ phát triển, độ nhạy của thiết bị tăng lên, yêu cầu nồng độ mẫu thấp hơn, trong khi thông lượng ánh sáng trong tế bào dò UV thương mại cao hơn đáng kể so với trước đây. điểm mà các gốc được hình thành bởi ánh sáng tia cực tím đủ nhiều, so với mức chất phân tích, để tạo ra các tín hiệu nhân tạo không mong muốn trong phổ MS. trong các mẫu điển hình hàng ngày.
(Bản dịch đầy đủ)
Hệ thống HPLC-UV-MS, là một sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) được kết nối với máy dò UV/Vis (quang phổ nhìn thấy tia cực tím) và máy quang phổ khối (MS), được sử dụng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực phân tích.Những đổi mới công nghệ đã giúp đo và phát hiện các mẫu có nồng độ thấp hơn, trong khi quang thông chiếu vào tế bào của máy dò UV cao hơn trước đây.Kết quả là, một lượng gốc tương đối lớn được tạo ra bởi UV so với mục tiêu phân tích và trở nên đủ để tạo ra các tạo phẩm trên phổ MS.Trong nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng ví dụ về quá trình phát triển thuốc để chỉ ra rằng quá trình oxy hóa được phát hiện bằng tia cực tím dẫn đến phổ khối sai lệch trong các mẫu phân tích hàng ngày, thông thường.
概要
【phương pháp】
Các tác giả sử dụng hơn XNUMX mẫu để chứng minh quá trình oxy hóa chất phân tích trong quá trình đo bằng máy dò UV.Các mục tiêu đo lường bao gồm axit amin, peptit, protein, axit nucleic và các hợp chất có trọng lượng phân tử thấp.
【kết quả】
Tác động của tia cực tím lớn hơn ở những khu vực của đường truyền chất lỏng nơi nồng độ mẫu thấp.Thật vậy, so với đỉnh pic (XNUMX) thì điểm đầu (XNUMX) và điểm kết thúc (XNUMX) của pic thể hiện tính oxi hóa của pic mạnh hơn.Các chất oxy hóa +XNUMX đến +XNUMX cũng được phát hiện ở cuối pic.
Hình 1. Khối phổ của Bombesin (Pyr-QRLG-NQWAVGHLM-NH2) trong phần (1) sớm, (2) chính và (3) phần rửa giải muộn của pic (hệ thống Agilent/Bruker). tắt được hiển thị là “không có tia cực tím”.
Bản vănĐối với các mẫu khác nhau (Bombesin, Cytochrom C, peptit có khoảng 10 gốc, Trp, Met, ketoprofen, v.v.), các sản phẩm phân hủy oxy hóa đã biết và 1-oxy hóa thành 3-oxy hóa (+16 đến +48) đã được đo. Tuy nhiên, trong một số trường hợp, mỗi pic của sản phẩm bị oxy hóa 1-50 được phát hiện ở cường độ tương đối khoảng XNUMX% của pic sản phẩm không đổi.
Hơn nữa, các tác giả cho thấy rằng sự xuất hiện của các đỉnh oxy hóa như vậy có thể được ngăn chặn theo hai cách.
① Tắt đèn UV
② Thêm BHT vào pha động
Quá trình oxy hóa mẫu được quan sát thấy trong cả hai dung môi hữu cơ pha B, metanol và axetonitril, nhưng dường như axetonitril tạo ra nhiều chất oxy hóa hơn.Ngoài ra, do tốc độ dòng chảy có liên quan trực tiếp đến thời gian chiếu xạ nên tốc độ dòng chảy càng nhanh thì càng ít bị oxy hóa.
Số lần hiển thị
Tôi biết có thể ánh sáng cực tím từ máy dò UV/vis sẽ khiến mẫu bị oxy hóa, nhưng tôi không nghĩ rằng nó thực sự sẽ đi xa đến mức này.
Nội dung của tài liệu này có trở thành vấn đề khi đo các chất chưa biết không?Khi đo lượng vết của các chất chuyển hóa chưa biết trong chất chuyển hóa, chất oxy hóa có thể bị tính nhầm thành các chất khác nhau và việc định lượng tương đối có thể gây ra lỗi.
Nguyên nhân là do phản ứng với các loại oxy phản ứng (ROS: Reactive Oxygen Species) như các gốc hydroxyl được tạo ra bởi tia cực tím, và sự phân hủy hoặc quang phân gián tiếp do kích thích các hợp chất có bước sóng hấp thụ khoảng 254 nm.
Có vẻ như tốt hơn là nên cẩn thận khi đo các mẫu dễ bị oxy hóa.Cụ thể, các axit amin như methionine (Met), tryptophan (Trp), cysteine (Cys) và tyrosine (Tyr), peptide và protein có chứa những chất này, và các hợp chất được phân loại là chất cảm quang, nghĩa là vòng thơm và nhóm carbonyl chẳng hạn như các hợp chất với
Chà, thành thật mà nói, tôi không thường đề cập đến phổ UV một cách chính xác trong phân tích MS, vì vậy có lẽ tốt hơn là tắt nó đi.
Trong phân tích định lượng nói chung bằng LC-UV-MS, tiêu chuẩn nội và ngoại được sử dụng và chúng phải được oxy hóa theo cùng một cách, vì vậy tôi không nghĩ rằng nó sẽ ảnh hưởng nhiều đến phân tích (cực kỳ nếu mẫu bị oxy hóa ở nồng độ thấp giới hạn dưới của định lượng có thể tăng lên...).