[مذكرة ورقية] أكسدة العينة بواسطة كاشف الأشعة فوق البنفسجية على HPLC-UV-MS
مذكرة رسالة
في تحليل HPLC-UV-MS ، تم الإبلاغ عن أن الأشعة فوق البنفسجية المنبعثة من كاشف الأشعة فوق البنفسجية تؤكسد العينة ويتم اكتشافها على طيف MS كقطع أثرية.
الأدب الهدف
تحليل HPLC - UV - MS: مصدر لعوامل الأكسدة الشديدة
المؤلف (الانتساب): فريتز شفايكارت وجوستاف هولث (أسترازينيكا)
المجلة (تاريخ النشر): الكيمياء التحليلية (2019/01)
https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.analchem.8b05845
الملخص الأصلي
يعد HPLC مقترنًا بكل من الأشعة فوق البنفسجية ومرض التصلب العصبي المتعدد إعدادًا راسخًا لتقييم النقاء في العديد من المجالات. مع تطور التكنولوجيا ، تزداد حساسية الأجهزة ، مما يستدعي تركيزًا أقل للعينة ، بينما يكون تدفق الضوء في خلية كاشف الأشعة فوق البنفسجية التجارية أعلى بكثير من السابق.هذا التطور له نعرض في هذا العمل العديد من الأمثلة من التطوير الصيدلاني حيث يؤدي تدهور الأشعة فوق البنفسجية في كاشف الأشعة فوق البنفسجية إلى أطياف جماعية مضللة بشدة في العينات العادية اليومية.
(ترجمة كاملة)
يستخدم نظام HPLC-UV-MS ، الذي يربط بين كاشف الأشعة فوق البنفسجية / المرئية الطيفية (الأشعة فوق البنفسجية المرئية) ومقياس الطيف الكتلي (MS) بالكروماتوجرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC) ، على نطاق واسع في العديد من مواقع التحليل.مع الابتكار التكنولوجي ، أصبح من الممكن قياس واكتشاف العينات ذات التركيزات المنخفضة ، في حين أن التدفق الضوئي المنبعث إلى خلية كاشف الأشعة فوق البنفسجية أعلى أيضًا من ذي قبل.نتيجة لذلك ، تم إنشاء كمية كبيرة نسبيًا من الجذور بواسطة الأشعة فوق البنفسجية مقارنة بهدف التحليل ، وتم إنشاء القطع الأثرية على طيف MS.في هذه الدراسة ، بأخذ تطوير الأدوية كمثال ، نظهر أن الأكسدة بواسطة أجهزة الكشف عن الأشعة فوق البنفسجية ينتج عنها طيف كتلي مضلل في العينات التحليلية اليومية العادية.
概要
【طريقة】
أظهر المؤلفون أكسدة العينة التحليلية أثناء القياس باستخدام كاشف الأشعة فوق البنفسجية باستخدام أكثر من XNUMX عينات مختلفة.تشمل أهداف القياس الأحماض الأمينية والببتيدات والبروتينات والأحماض النووية والمركبات ذات الوزن الجزيئي المنخفض ، إلخ.
[النتيجة]
كان تأثير الأشعة فوق البنفسجية أكبر في مناطق تركيز العينة المنخفض في طريق توصيل السائل.بالتأكيد ، تظهر ذروة الأكسدة بقوة أكبر عند نقطة البداية (XNUMX) ونقطة النهاية (XNUMX) للذروة منها عند قمة القمة (XNUMX).حتى +XNUMX إلى +XNUMX مؤكسدات يتم اكتشافها في نهاية الذروة.
الشكل 1. أطياف الكتلة من Bombesin (Pyr-QRLG-NQWAVGHLM-NH2) في الجزء (1) المبكر ، (2) الرئيسي ، و (3) جزء التصفية المتأخر من الذروة (نظام Agilent / Bruker). يظهر الطيف مع مصباح الأشعة فوق البنفسجية مطفأ على أنه "لا للأشعة فوق البنفسجية".
نصفي التبرع ، يتم قياس منتجات التحلل المؤكسد المعروفة و monooxidants إلى ثلاثي أكسيد (+10 إلى +1) لعينات مختلفة (Bombesin ، Cytochrome C ، الببتيدات من حوالي 3 بقايا ، Trp ، Met ، كيتوبروفين ، إلخ). ومع ذلك ، في بعض في الحالات ، تم الكشف عن كل من قمم الأكسيد 16-48 بكثافة نسبية تبلغ حوالي 1٪ فيما يتعلق بقمة الشكل غير المتغيرة.
علاوة على ذلك ، أظهر المؤلفون أنه يمكن منع ظهور مثل هذه القمم المؤكسدة بطريقتين:
① قم بإيقاف تشغيل ضوء الأشعة فوق البنفسجية
② أضف BHT أثناء مرحلة الجوال
لوحظ تأكسد العينة في كل من الميثانول والأسيتونيتريل كمذيب عضوي للمرحلة B ، ولكن يبدو أن الأسيتونيتريل أنتج المزيد من الأكاسيد.أيضًا ، نظرًا لأن سرعة التدفق مرتبطة ارتباطًا مباشرًا بوقت التشعيع ، فكلما كانت أسرع ، كانت مؤكسدة أقل.
انطباعات
كنت أعلم أنه من الممكن أن يتسبب ضوء الأشعة فوق البنفسجية من كاشف الأشعة فوق البنفسجية / المرئية في أكسدة العينة ، لكنني لم أعتقد أنه سيكون في الواقع إلى هذا الحد.
هل يمثل محتوى هذه الوثيقة مشكلة عند قياس المواد المجهولة؟عند قياس كمية صغيرة جدًا من المستقلبات غير المعروفة باستخدام المستقلبات ، يتم حساب المؤكسدات عن طريق الخطأ على أنها مواد مختلفة ، ومن المحتمل أن يتسبب التقدير الكمي النسبي في حدوث خطأ.
السبب هو التفاعل مع أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS: أنواع الأكسجين التفاعلية) مثل جذور الهيدروكسيل الناتجة عن الأشعة فوق البنفسجية ، وإثارة المركبات ذات الطول الموجي الممتص بالقرب من 254 نانومتر للتحلل أو التحلل الضوئي غير المباشر.
يبدو أنه يجب توخي الحذر عند قياس العينات التي تتأكسد بسهولة.على وجه الخصوص ، الأحماض الأمينية مثل الميثيونين (Met) ، التربتوفان (Trp) ، السيستين (Cys) ، التيروزين (Tyr) ، بروتينات الببتيد التي تحتوي على هذه ، والمركبات المصنفة على أنها محسسات ضوئية ، أي الحلقات العطرية ومجموعات الكربونيل. يتراكب مع.
حسنًا ، بصراحة ، لا أشير غالبًا إلى طيف الأشعة فوق البنفسجية بحزم في تحليل MS ، لذلك قد يكون نملة حتى لو تم إيقاف تشغيله.
في التحليل الكمي العام باستخدام LC-UV-MS ، يتم استخدام مواد معيارية داخلية وخارجية ، ويجب أن تتأكسد بنفس الطريقة ، لذلك أشعر أنها لا تؤثر على التحليل كثيرًا (شديد). أكسدة العينة عند مستويات التركيز المنخفضة قد ترفع الحد الأدنى للتقدير الكمي ...).