Weefselafgeleide fracties die vaak worden gebruikt in hepatocyten, S9 en in-vitrotests
Ik zal notities opschrijven over de kenmerken en verschillen van van leverweefsel afgeleide ingrediënten die vaak worden gebruikt in in-vitro-onderzoeken voor farmacokinetiek en geneesmiddelenmetabolisme-onderzoeken.
hepatocyt
Hepatocyten werden geïsoleerd uit een gehomogeniseerde suspensie van lever (leverhomogenaat, vrije levercellen).
Het is relatief dicht bij in vivo omdat hepatocyten intact worden gehouden. De reproduceerbaarheid van de conjugatiereactie, die moeilijk verloopt met S9 of microsomale fracties, is ook goed.Het kan worden gebruikt om transporter-gemedieerde opname, geneesmiddel-geneesmiddelinteracties en CYP-enzyminductie te evalueren.Aan de andere kant is het nodig om aandacht te besteden aan de overlevingskans tijdens cryopreservatie en ontdooien.
Fractie S9
Als een afbeelding wordt een fractie met metabole enzymen geëxtraheerd uit hepatocyten.
Het supernatant (supernatant) verkregen door het homogenaat van de lever te centrifugeren, waaruit celmembranen, kernen, mitochondriën, etc. zijn verwijderd.Het bevat veel enzymgroepen die betrokken zijn bij het metabolisme van geneesmiddelen, zoals:
cytochroom P450 (CYP), flavinebevattende mono-oxygenase (FMO), carboxyesterase (CES), epoxidehydrolase (EH), UDP-glucuronyltransferase (UGT), sulfotransferase (SULT), glutathion-S-transferase (GST), methyltransferase, acetyltransferase, enz. .
lever microsomen
Neerslag bij verder centrifugeren van S9.Inclusief endoplasmatisch reticulumfragmenten (afscheuren tijdens centrifugeren) en lysosomen.
een van de organellen.Het heeft een structuur met een gaasmembraan.
Het heeft belangrijke functies bij het metabolisme van suiker/lipiden en de synthese van steroïden/eiwitten.
Cytochroom P450, oxygenase, etc. zijn gelokaliseerd in het membraan.
Een blaasje bestaande uit een enkele laag membraan.
Bevat hydrolasen zoals glycosidasen en peptidasen.
Belangrijk voor intracellulaire vreemde lichamen en autodigestie.
Aangezien veel medicijnen en vreemde stoffen worden gemetaboliseerd en ontgift door CYP's, worden "microsomale fracties, die eenvoudige systemen zijn die CYP's bevatten", veel gebruikt in experimenten (hoewel een ander metabolisme dan CYP's de laatste jaren ook belangrijk is).Het is gemakkelijk te gebruiken om redenen zoals stabiliteit tegen cryopreservatie, reproduceerbaarheid en een breed scala aan in de handel verkrijgbare producten.
CYP, UGT, CES, enz.
cytosol
Supernatant van verdere centrifugatie van S9
GST, SULT, enz.