[Бумажная памятка] Окисление образца УФ детектором УФ на ВЭЖХ-УФ-МС
Памятка к трактату
В анализе HPLC-UV-MS сообщается, что ультрафиолетовые лучи, испускаемые УФ-детектором, окисляют образец и обнаруживаются на спектре MS как артефакты.
Целевая литература
Анализ ВЭЖХ – УФ – МС: источник сильных артефактов окисления
Автор (Принадлежность): Фриц Швейкарт и Густав Хюльт (AstraZeneca)
Журнал (дата публикации): Аналитическая химия (2019)
https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.analchem.8b05845
Оригинальная аннотация
ВЭЖХ в сочетании с УФ и МС - это устоявшаяся установка для оценки чистоты во многих областях. С развитием технологий чувствительность прибора увеличивается, что требует более низкой концентрации образца, в то время как световой поток в коммерческой ячейке УФ-детектора значительно выше, чем раньше. В этой работе мы показываем несколько примеров из фармацевтических разработок, где УФ-деградация в УФ-детекторе приводит к серьезным искажениям масс-спектров в типичных повседневных образцах.
(Полный перевод)
Система ВЭЖХ-УФ-МС, которая соединяет детектор УФ / видимого диапазона (спектроскопия в ультрафиолетовой и видимой области) и масс-спектрометр (МС) с высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ), широко используется во многих аналитических центрах.Благодаря технологическим инновациям стало возможным измерять и обнаруживать образцы с более низкими концентрациями, в то время как световой поток, излучаемый в ячейку УФ-детектора, также выше, чем раньше.В результате ультрафиолетовое излучение генерировало относительно большое количество радикалов по сравнению с объектом анализа, а в спектре МС генерировались артефакты.В этом исследовании на примере разработки лекарств мы показываем, что окисление УФ-детекторами приводит к искажению масс-спектра в обычных ежедневных аналитических пробах.
概要
【Метод】
Авторы продемонстрировали окисление аналитического образца во время измерения УФ-детектором с использованием более XNUMX различных образцов.Цели измерения включают аминокислоты, пептиды, белки, нуклеиновые кислоты, низкомолекулярные соединения и т. Д.
【результат】
Эффект УФ был сильнее в областях с низкой концентрацией образца в пути доставки жидкости.Конечно, пик окислителя сильнее проявляется в начальной точке (XNUMX) и конечной точке (XNUMX) пика, чем на вершине пика (XNUMX).В конце пика обнаруживаются даже окислители от +XNUMX до +XNUMX.
Рисунок 1. Масс-спектры бомбезина (Pyr-QRLG-NQWAVGHLM-NH2) во фракции пика (1) раннего, (2) основного и (3) позднего элюирования (система Agilent / Bruker). Для сравнения, МС спектр с выключенной УФ-лампой отображается как «нет УФ».
ПредложениеПри донорстве измеряются известные продукты окислительного разложения и монооксиданты до триоксидов (от +10 до +1) для различных образцов (бомбезин, цитохром C, пептиды с примерно 3 остатками, Trp, Met, кетопрофен и т. Д.). В некоторых случаях каждый из 16-48 оксидных пиков детектировался с относительной интенсивностью около 1% от интенсивности неизмененного пика.
Кроме того, авторы показали, что появление таких пиков окислителя можно предотвратить двумя способами:
① Выключите ультрафиолетовый свет
② Добавить BHT на мобильной фазе
Окисление образца наблюдается как в метаноле, так и в ацетонитриле как органическом растворителе фазы B, но кажется, что ацетонитрил произвел больше оксидов.Кроме того, поскольку скорость потока напрямую связана со временем облучения, чем она была быстрее, тем меньше было окисления.
Впечатления
Я знал, что ультрафиолетовый свет от УФ / видимого детектора может вызвать окисление образца, но я не думал, что на самом деле это будет так далеко.
Является ли содержание этого документа проблемой при измерении неизвестных веществ?При измерении очень небольшого количества неизвестных метаболитов с помощью метаболомики оксиданты ошибочно считаются разными веществами, и относительное количественное определение может вызвать ошибку.
Причиной является реакция с химически активными формами кислорода (ROS: Reactive Oxygen Species), такими как гидроксильные радикалы, генерируемые УФ-излучением, и возбуждение соединений с длиной волны поглощения около 254 нм для разложения или непрямого фоторазложения.
Похоже, что при измерении легко окисляемых образцов следует соблюдать осторожность.В частности, аминокислоты, такие как метионин (Met), триптофан (Trp), цистеин (Cys) и тирозин (Tyr), пептидные белки, содержащие их, и соединения, классифицируемые как фотосенсибилизаторы, то есть ароматические кольца и карбонильные группы. Соединения с.
Честно говоря, я нечасто ссылаюсь на УФ-спектр при анализе МС, так что это может быть муравей, даже если он выключен.
В общем количественном анализе с использованием ЖХ-УФ-МС используются внутренние и внешние стандартные вещества, и они должны окисляться одинаково, поэтому я чувствую, что они не так сильно влияют на анализ (крайнее). Окисление образца при низкие уровни концентрации могут поднять нижний предел количественного определения ...).