[纸质备忘] HPLC-UV-MS上紫外检测器的紫外光氧化样品
论文备忘录
在HPLC-UV-MS分析中，据报道从UV检测器发出的紫外线会使样品氧化，并在MS光谱上被检测为伪影。
目标文献
HPLC-UV-MS分析：严重氧化伪像的来源
作者（隶属关系）：Fritz Schweikart和Gustaf Hulthe（阿斯利康）
期刊（出版日期）：分析化学（2019/01）
https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.analchem.8b05845
原始摘要
HPLC结合了UV和MS，是在许多领域进行纯度评估的既定装置，随着技术的发展，仪器灵敏度提高，要求降低样品浓度，而商用UV检测器池中的光通量却大大高于以前。在这项工作中，我们展示了一些药品开发的示例，其中典型的日常样品中UV检测器中的UV降解导致严重误导质谱。
（完整翻译）
HPLC-UV-MS系统将UV / Vis（紫外可见光谱）检测器和质谱仪（MS）连接到高效液相色谱（HPLC），在许多分析场所中得到了广泛使用。通过技术创新，可以测量和检测较低浓度的样品，同时发射到UV检测器池的光通量也比以前更高。结果，与分析目标相比，UV产生了相对大量的自由基，并且在MS光谱上产生了伪影。在这项研究中，以药物开发为例，我们显示了紫外线检测器的氧化作用会导致普通日常分析样品中的质谱产生误导。
总结
【方法】
作者已经证明了使用XNUMX种以上不同样品的UV检测器在测量过程中分析样品的氧化。测量目标包括氨基酸，肽，蛋白质，核酸，低分子量化合物等。
[结果]
在液体输送路径中样品浓度低的区域，紫外线的影响更大。当然，氧化剂峰在峰的起点（XNUMX）和终点（XNUMX）比在峰顶（XNUMX）出现得更强烈。在峰的末端甚至检测到+XNUMX至+XNUMX氧化剂。
图1.峰（2）的早期，（1）主峰和（2）晚期洗脱部分（安捷伦/布鲁克系统）中Bombesin（Pyr-QRLG-NQWAVGHLM-NH3）的质谱图作比较，MS紫外线灯关闭时的光谱显示为“无紫外线”。
文在捐赠中，对各种样品（Bombesin，细胞色素C，约10个残基的肽，Trp，Met，酮洛芬等）测量已知的氧化分解产物和对三氧化物的单氧化剂（+1至+3）。在这种情况下，检测到的16-48个氧化峰中的每个峰的相对强度约为未变化峰的1％。
此外，作者已经表明，可以通过两种方式防止此类氧化剂峰的出现：
①关闭紫外线
②在流动阶段添加BHT
作为相B的有机溶剂，在甲醇和乙腈中均观察到样品的氧化，但乙腈似乎产生更多的氧化物。另外，由于流速与照射时间直接相关，因此速度越快，其氧化越少。
印象数
我知道来自UV / Vis检测器的紫外线可能会导致样品氧化，但我认为实际上不会这么远。
测量未知物质时，本文档的内容是否有问题？当用代谢组学方法测量极少量的未知代谢物时，氧化剂被错误地算作不同的物质，并且相对定量可能会引起误差。
原因是与紫外线等活性氧（ROS：Reactive Oxygen Species）发生反应，以及吸收波长接近254 nm的化合物被激发以分解或间接进行光分解的反应。
似乎在测量容易氧化的样品时要小心。特别是诸如蛋氨酸（Met），色氨酸（Trp），半胱氨酸（Cys）和酪氨酸（Tyr）的氨基酸，包含这些氨基酸的肽蛋白以及被归类为光敏剂的化合物，即芳香环和羰基。与化合物。
好吧，说实话，在质谱分析中，我并不经常提到紫外线光谱，因此即使将其关闭，它也可能是一只蚂蚁。
在使用LC-UV-MS进行的一般定量分析中，使用的是内标和外标物质，这些物质应以相同的方式氧化，因此，我认为它们对分析的影响不大（极端）。低浓度水平可能会提高定量下限...）。